人Ⅲ型膠原(PⅢP)elisa試劑盒基本信息
Ⅲ型膠原蛋白，PⅢP，Ⅲ型前膠原經(jīng)氨基端內(nèi)切肽酶。
中文名 Ⅲ型膠原蛋白
正常值 0.6μg/ml
簡(jiǎn) 稱(chēng) PⅢP
作用酶 Ⅲ型前膠原經(jīng)氨基端內(nèi)切肽酶
1979年國(guó)外已建立測(cè)定血清PⅢP的放射免疫法(RIA)，并證實(shí)肝纖維化時(shí)血清PⅢP含量與肝炎癥，壞死和肝纖維化有關(guān)，但以肝纖維化相關(guān)為主，因此血清PⅢP仍然是肝纖維化的重要標(biāo)記物。PⅢP對(duì)于診斷兒童肝疾病沒(méi)有意義，它隨兒童年齡的增長(zhǎng)有所升高。許多學(xué)者報(bào)道，血清PⅢP是反應(yīng)成人肝纖維化活動(dòng)的良好指標(biāo)，可彌補(bǔ)肝活檢不能動(dòng)態(tài)觀察等不足。肝硬化患者明顯升高，但在肝硬化晚期，因Ⅲ型前膠原肽合成率降低，血清中PⅢP反而低于早期。PⅢP在區(qū)別慢性活動(dòng)性肝炎與慢性遷延性肝炎有良好的幫助，慢性肝PⅢP水平明顯升高，而在慢遷肝其含量與正常人無(wú)明顯差別。
人Ⅲ型膠原(PⅢP)elisa試劑盒如何操作
1. 包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃ 過(guò)夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡(jiǎn)稱(chēng)洗滌，下同）。
2. 加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗滌。（同時(shí)做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔）。
3. 加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時(shí)，洗滌。
4. 加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
5. 終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽(yáng)性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽(yáng)性。
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